OAZ CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430124-ACT

Das murine Gen **Zfp423** kodiert den multi-Zinkfinger-Transkriptionsregulator **OAZ**, ein DNA-bindendes Protein, das entwicklungsbiologische Signalinputs integriert, um die Lineage-Festlegung und Differenzierungsprogramme zu steuern. OAZ ist Teil von Transkriptionsnetzwerken, die mit der **BMP/SMAD**-Signalübertragung verknüpft sind, und interagiert mit Kofaktoren, die die Genexpression in Neuronen und Adipozyten prägen und so Entscheidungen über Zellschicksal und Reifung beeinflussen. Im Nervensystem ist Zfp423 an der Entwicklung des Kleinhirns und der neuronalen Musterbildung beteiligt, während es in metabolischen Geweben zur Adipogenese und zur Energiehomöostase beiträgt. Eine Fehlregulation der mit Zfp423 assoziierten Transkriptionsprogramme ist daher für Modelle neuroentwicklungsbedingter Defekte und metabolischer Phänotypen relevant, bei denen veränderte Differenzierung und Signalweg-Crosstalk zentrale Mechanismen darstellen.

OAZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Zfp423-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OAZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Zfp423-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Zfp423-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OAZ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Zfp423-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OAZ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OAZ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Zfp423-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.