OATP-H Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404706

Descripción general

SLCO4C1 codifica el polipéptido transportador de aniones orgánicos humano OATP-H (OATP4C1), un transportador de solutos multiespecífico que media la captación independiente de sodio de una variedad de metabolitos endógenos y aniones orgánicos de tipo xenobiótico a través de las membranas celulares. Este transportador contribuye a procesos de transporte transmembrana que determinan la exposición celular a compuestos circulantes e influyen en el manejo metabólico posterior y en las vías de detoxificación. La expresión o actividad alteradas de miembros de la familia OATP se han asociado con cambios en la distribución tisular de sustratos y con perturbaciones de la homeostasis metabólica, lo que convierte a SLCO4C1 en un objetivo útil para estudiar fenotipos impulsados por el transporte. En investigación biomédica, la perturbación de SLCO4C1 permite la interrogación mecanística de las relaciones transportador–sustrato y su impacto en la señalización celular y las respuestas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OATP-H (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLCO4C1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLCO4C1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLCO4C1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OATP-H.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLCO4C1 para la investigación de la señalización de OATP-H, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLCO4C1 críticos para la función de OATP-H
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLCO4C1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OATP-H CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido OATP-H CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLCO4C1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OATP-H (h) y el plásmido HDR OATP-H (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLCO4C1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLCO4C1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.