OAT3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422696

Descripción general

Slc22a8 codifica el transportador de aniones orgánicos 3 (OAT3), un transportador de captación basolateral y polispecífico que media la importación celular de diversos metabolitos endógenos y aniones orgánicos xenobióticos. En el túbulo proximal del riñón de ratón, OAT3 favorece la secreción vectorial al acoplar la captación desde la sangre con transportadores apicales de eflujo situados aguas abajo, modulando el aclaramiento renal y la exposición sistémica a muchas moléculas pequeñas. Al influir en el intercambio de aniones orgánicos y en el manejo intracelular de metabolitos, OAT3 contribuye a la homeostasis de solutos y se relaciona con vías implicadas en el transporte tubular, la eliminación de toxinas urémicas y la susceptibilidad a la nefrotoxicidad. Las alteraciones en la actividad de OAT3 se han vinculado con mecanismos de lesión renal y con variabilidad farmacocinética, lo que convierte a Slc22a8 en un locus útil para modelar fenotipos dependientes de transportadores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO OAT3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc22a8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc22a8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc22a8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína OAT3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc22a8 para la investigación de la señalización de OAT3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc22a8 críticos para la función de OAT3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc22a8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido OAT3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido OAT3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc22a8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR OAT3 (m) y el plásmido HDR OAT3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc22a8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc22a8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.