Particules Lentivirales d'Activation (h) Nurr1: sc-400289-LAC

NR4A2 code pour le récepteur nucléaire orphelin Nurr1, un facteur de transcription indépendant des ligands qui régule des programmes géniques contrôlant la différenciation neuronale, le maintien synaptique et le niveau de l’inflammation. Nurr1 module la transcription via des interactions avec des corégulateurs et des éléments de réponse, influençant des voies liées à l’identité des neurones dopaminergiques, à l’homéostasie mitochondriale et à l’activation microgliale. En biologie humaine, des modifications de l’expression ou de l’activité de NR4A2 ont été associées à des mécanismes pertinents pour des maladies neurodégénératives et neuropsychiatriques, notamment le dysfonctionnement dopaminergique et la neuroinflammation. Ces caractéristiques font de NR4A2/Nurr1 un nœud largement étudié au sein de réseaux transcriptionnels qui couplent les réponses au stress cellulaire à des phénotypes neuronaux et immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales Nurr1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NR4A2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Nurr1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NR4A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Nurr1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NR4A2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.