Plasmide Double Nickase (m) Nur77: sc-420884-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Nur77 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Nur77 Double Nickase (m) et le plasmide Nur77 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nr4a1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Nur77 Antibody (C-5): sc-365113
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Nur77 | sc-420884-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Nur77 | sc-420884-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Nr4a1** code le récepteur nucléaire orphelin **Nur77 (NR4A1)**, un facteur de transcription à réponse immédiate (« immediate-early ») qui intègre les signaux issus de l’activation du récepteur des lymphocytes T (TCR), des cascades MAPK et des programmes inflammatoires liés à NF-κB. Nur77 régule des réseaux de gènes contrôlant la sélection négative des thymocytes, l’anergie des lymphocytes T périphériques, la polarisation des macrophages et l’adaptation métabolique, avec des effets dépendant du contexte sur l’apoptose et les voies mitochondriales. Dans le système nerveux, il est rapidement induit par l’activité neuronale et les hormones de stress, reliant la signalisation dépendante du calcium aux réponses transcriptionnelles. Une signalisation NR4A1 dérégulée a été impliquée dans des modèles d’auto-immunité et d’inflammation chronique, d’athérosclérose, dans des programmes de survie des cellules cancéreuses, ainsi que dans des processus neuro-inflammatoires et neurodégénératifs.
Nur77 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nr4a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nr4a1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nr4a1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nr4a1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.