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NUDT5CRISPR激活质粒(m) | sc-424768-ACT | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Nudt5 编码 NUDT5,这是一种 Nudix 水解酶,可通过水解 ADP-核糖及其相关衍生物来调控核苷酸代谢物稳态,从而影响 ADP-核糖基化及其下游信号通路所需底物的可用性。通过对核苷酸库和 ADP-核糖周转的控制,NUDT5 与 DNA 损伤应答、染色质调控以及细胞应激适应等过程发生交叉。ADP-核糖代谢异常与增殖失调和基因组维护通路紊乱有关,因此 Nudt5 是研究癌症生物学及其他涉及 DNA 修复受损与代谢重编程疾病机制的相关靶点。在小鼠模型中,对 Nudt5 的扰动有助于探究核苷酸信号如何影响转录程序与细胞状态转换。
NUDT5 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Nudt5的表达。
NUDT5 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Nudt5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Nudt5转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性NUDT5表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Nudt5位点,并能够研究内源性位点上依赖于NUDT5的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Nudt5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NUDT5通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。