NUDT21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402082

Übersicht

NUDT21 kodiert eine zentrale Untereinheit des Cleavage-Factor-Im-(CFIm)-Komplexes, der UGUA-Motive erkennt und die 3′-End-Prozessierung sowie Polyadenylierung von Prä-mRNAs fördert. Durch die Beeinflussung der Wahl alternativer Polyadenylierungsstellen trägt NUDT21 zur Kontrolle der 3′-UTR-Länge, der mRNA-Stabilität und der translationalen Ausbeute bei und prägt damit Genexpressionsprogramme, die mit Proliferation, Differenzierung und Stressantworten verknüpft sind. Eine veränderte NUDT21-Aktivität ist mit weitreichenden Verschiebungen der alternativen Polyadenylierung assoziiert, die regulatorische Netzwerke umgestalten können, einschließlich der mikroRNA-vermittelten Kontrolle und von Interaktionen mit RNA-bindenden Proteinen. Eine Dysregulation dieser RNA-Verarbeitungswege wurde in unterschiedlichen krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter krebsassoziierte Umbauten des Transkriptoms und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen.

Das NUDT21 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NUDT21-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NUDT21-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NUDT21 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NUDT21-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NUDT21-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NUDT21-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NUDT21-Exone abzielen, die für die NUDT21-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NUDT21-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NUDT21 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NUDT21 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NUDT21-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NUDT21 HDR-Plasmid (h) und NUDT21 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NUDT21-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NUDT21-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.