nucleobindin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405167

Übersicht

NUCB1 kodiert Nucleobindin, ein calciumbindendes Protein, das im sekretorischen Weg lokalisiert ist und an der Ca2+-abhängigen Regulation des intrazellulären Transports und der Proteinsortierung beteiligt ist. Über EF-Hand-Motive und Interaktionen mit luminaler Fracht wird NUCB1 mit der Homöostase von Golgi-Apparat und ER, dem vesikelvermittelten Transport sowie stressadaptiven sekretorischen Antworten in Verbindung gebracht. Eine veränderte NUCB1-Expression wurde in verschiedenen Kontexten mit gestörter Proteostase und zellulärer Stresssignalgebung beschrieben, was NUCB1 für mechanistische Studien zur Sekretion, Membrandynamik und Ca2+-regulierten Signalwegen relevant macht. NUCB1-abhängige Prozesse werden zudem in Krankheitsmodellen untersucht, in denen Sekretion, Aggregation oder Stressantworten von Organellen zur Pathophysiologie beitragen.

Das nucleobindin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NUCB1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NUCB1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NUCB1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die nucleobindin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NUCB1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der nucleobindin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NUCB1-Exone abzielen, die für die nucleobindin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NUCB1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom nucleobindin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom nucleobindin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NUCB1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das nucleobindin HDR-Plasmid (h) und nucleobindin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NUCB1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NUCB1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.