Plasmide CRISPR/Cas9 KO NUAK1/ARK5 (m): sc-429607

Présentation

Nuak1 code pour NUAK1/ARK5, une kinase sérine/thréonine de la famille des kinases apparentées à l’AMPK, qui relie l’état énergétique cellulaire à des programmes adaptatifs contrôlant la survie, la polarité, l’adhésion et le remodelage du cytosquelette. La signalisation de NUAK1 a été associée à la régulation de l’activité de la phosphatase de la myosine, à des cascades de kinases activées en réponse au stress, ainsi qu’à la coordination des réponses métaboliques en situation de limitation en nutriments. Dans des systèmes murins, l’activité de NUAK1/ARK5 est utilisée pour étudier comment les voies de détection de l’énergie s’articulent avec la migration, des comportements de type invasif et la résistance à l’apoptose induite par le stress. Un dérèglement de la fonction de NUAK1/ARK5 a été impliqué dans des phénotypes oncogéniques et métaboliques, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles de biologie tumorale et de stress cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NUAK1/ARK5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nuak1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nuak1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nuak1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NUAK1/ARK5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nuak1 pour l'étude de la signalisation de NUAK1/ARK5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nuak1 essentiels à la fonction de NUAK1/ARK5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nuak1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NUAK1/ARK5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NUAK1/ARK5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nuak1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NUAK1/ARK5 plasmide HDR (m) et le NUAK1/ARK5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nuak1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nuak1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.