NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429607

Übersicht

Nuak1 kodiert NUAK1/ARK5, eine Serin/Threonin-Kinase aus der Familie der AMPK-verwandten Kinasen, die den zellulären Energiestatus mit adaptiven Programmen verknüpft, welche Überleben, Polarität, Adhäsion und den Umbau des Zytoskeletts steuern. Die NUAK1-Signalgebung wird mit der Regulation der Myosinphosphatase-Aktivität, stressresponsiven Kinasekaskaden und der Koordination metabolischer Antworten bei Nährstofflimitierung in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird die NUAK1/ARK5-Aktivität genutzt, um zu untersuchen, wie energie-sensorische Signalwege mit Migration, invasionsähnlichem Verhalten und Resistenz gegenüber stressinduzierter Apoptose zusammenhängen. Eine fehlregulierte NUAK1/ARK5-Funktion wurde mit onkogenen und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was ihre Eignung als mechanistischer Knotenpunkt in Modellen der Tumorbiologie und des zellulären Stresses unterstreicht.

Das NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nuak1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nuak1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nuak1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NUAK1/ARK5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nuak1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NUAK1/ARK5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nuak1-Exone abzielen, die für die NUAK1/ARK5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nuak1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nuak1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NUAK1/ARK5 HDR-Plasmid (m) und NUAK1/ARK5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nuak1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nuak1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.