NT-3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401458-LAC

A neurotrofina 3 (NTF3) codifica a NT-3, um fator neurotrófico secretado essencial para a sobrevivência neuronal, a diferenciação e a maturação sináptica durante o desenvolvimento e na manutenção de tecidos adultos. A NT-3 sinaliza principalmente através do recetor tirosina-quinase TRKC/NTRK3, ativando as cascatas MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ para regular o crescimento de neuritos, a neurotransmissão e a plasticidade dependente da atividade. Para além do sistema nervoso, a NT-3 influencia as interações entre neurónios sensoriais e os seus alvos e pode modular respostas da glia e de tecidos periféricos através de redes de sinalização mediadas por recetores de neurotrofinas. A atividade desregulada da via NTF3/NT-3 tem sido implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos e é frequentemente estudada no contexto de alterações de sinalização mediadas por NTRK relevantes para perturbações do sistema nervoso.

As Partículas de Ativação Lentivirais NT-3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NTF3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NT-3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NTF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NT-3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NTF3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.