Nrf2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421869-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nrf2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nrf2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Nrf2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nfe2l2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nrf2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Nfe2l2** kodiert **Nrf2**, einen bZIP-Transkriptionsfaktor, der die zelluläre Abwehr gegen elektrophilen und oxidativen Stress koordiniert, indem er an Antioxidant Response Elements (AREs) bindet und Gene der Detoxifikation, Redoxregulation und Proteostase induziert. Unter basalen Bedingungen wird die Nrf2-Aktivität durch **KEAP1**-abhängige Ubiquitinierung und proteasomalen Abbau gebremst, während Stresssignale Nrf2 stabilisieren und dadurch Transkriptionsprogramme u. a. in der Glutathion‑Stoffwechselregulation, der NADPH‑Regeneration und der Eliminierung von Xenobiotika umgestalten. Die Nrf2-Signalgebung ist mit Entzündungs- und Stoffwechselnetzwerken verflochten, einschließlich Crosstalk mit **NF‑κB** und der mitochondrialen Homöostase, und prägt so adaptive Antworten auf Umwelt- und endogene Stressoren. Eine Fehlregulation der **KEAP1–Nrf2**-Achse wird in Modellen der Karzinogenese, chronisch entzündlicher Zustände, Neurodegeneration und metabolischer Dysfunktion beschrieben, wodurch **Nfe2l2** ein häufiges Ziel für mechanistische Studien zur Stressresilienz und Redoxbiologie ist.
Nrf2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nfe2l2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nfe2l2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nfe2l2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nfe2l2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.