Nrf1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401053-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nrf1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nrf1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nrf1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NFE2L1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nrf1: sc-515360
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nrf1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401053-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401053-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L1 kodiert den Transkriptionsfaktor Nrf1, einen membrangebundenen CNC-bZIP-Regulator, der die Proteostase mit der zellulären Redox-Homöostase verknüpft. Bei Proteasomenstress wird Nrf1 ER-assoziiert prozessiert und transloziert in den Zellkern, wo es über Antioxidant-Response-Elemente Proteasomenuntereinheit-Gene und weitere Entgiftungsprogramme induziert und damit die Kapazität des Ubiquitin-Proteasom-Systems, den Lipidstoffwechsel und die Stressanpassung koordiniert. Die Nrf1-Signalgebung überschneidet sich mit NRF2/KEAP1, der Unfolded-Protein-Response und Stoffwechselwegen, die entzündliche Reaktionen sowie oxidative Schädigungsantworten prägen. Eine Fehlregulation der Nrf1-abhängigen Transkription wurde mit veränderter Proteasomenfunktion, metabolischem Ungleichgewicht und kontextabhängigen Beiträgen zu onkogenen und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, was Nrf1 für mechanistische Studien der Proteinkontrolle und -qualitätskontrolle relevant macht.
Nrf1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFE2L1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFE2L1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFE2L1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFE2L1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.