NRF-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421961

Descripción general

El Nrf1 (NRF-1) de ratón codifica un factor de transcripción que coordina el control nuclear de la biogénesis mitocondrial y la función respiratoria mediante la regulación de genes implicados en la fosforilación oxidativa, en la maquinaria de transcripción/replicación del ADN mitocondrial y en el metabolismo energético celular. NRF-1 integra las señales de nutrientes y de factores de crecimiento con la progresión del ciclo celular y la homeostasis redox, favoreciendo la proteostasis y las respuestas adaptativas al estrés metabólico. La desregulación de los programas transcripcionales dependientes de NRF-1 se ha vinculado a alteraciones de la función mitocondrial y a fenotipos de estrés oxidativo relevantes para la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y la reprogramación metabólica asociada al cáncer en modelos experimentales. Como nodo central en la comunicación mitocondria–núcleo, NRF-1 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la bioenergética, el manejo de las especies reactivas de oxígeno (ROS) y redes transcripcionales que moldean la diferenciación y la resiliencia al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NRF-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nrf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nrf1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nrf1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NRF-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nrf1 para la investigación de la señalización de NRF-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nrf1 críticos para la función de NRF-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nrf1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NRF-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NRF-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nrf1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NRF-1 (m) y el plásmido HDR NRF-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nrf1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nrf1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.