Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NRAMP 2 Double Nickase Plasmid (h): sc-418176-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NRAMP 2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NRAMP 2 Double-Nickase-Plasmid (h) und NRAMP 2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC11A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NRAMP 2: sc-166884
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NRAMP 2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418176-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NRAMP 2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418176-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC11A2 kodiert NRAMP2 (DMT1), einen protonengekoppelten Transporter für zweiwertige Metalle, der die zelluläre Aufnahme von zweiwertigem Eisen und anderen Übergangsmetallen über endosomale und Plasmamembranen vermittelt. NRAMP2 unterstützt die transferrinabhängige Freisetzung von Eisen aus Endosomen und trägt in Zusammenarbeit mit Ferrireduktasen sowie der Maschinerie des Eisenexports zur systemischen Eisenverarbeitung bei. Dadurch ist es mit der Eisenhomöostase, dem Gleichgewicht oxidativen Stresses und der metabolischen Regulation verknüpft. Eine veränderte SLC11A2-Aktivität wird mit Störungen des Eisenstoffwechsels assoziiert, darunter mikrozytäre Anämie und Phänotypen einer Eisenüberladung in Geweben, und wurde in Kontexten wie Neurodegeneration und Entzündung untersucht, in denen Metalltransport die zelluläre Vulnerabilität modulieren kann. In humanen Zellen überschneidet sich die NRAMP2-Funktion mit Signalwegen, die Endozytose, lysosomales Metallrecycling und die eisenresponsive Genregulation steuern.
NRAMP 2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC11A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC11A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC11A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC11A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.