Plasmide CRISPR d'Activation (h) NR5A2: sc-402656-ACT

NR5A2 (également appelé liver receptor homolog-1, LRH-1) est un facteur de transcription humain appartenant à la famille des récepteurs nucléaires orphelins. Il régule des programmes d’expression génique qui contrôlent le métabolisme du cholestérol et des acides biliaires, la stéroïdogenèse et la différenciation cellulaire. Il agit par une liaison à l’ADN spécifique de séquence et par le recrutement de co‑régulateurs, afin de façonner des réseaux transcriptionnels impliqués dans l’homéostasie lipidique et le maintien des tissus épithéliaux. L’activité de NR5A2 s’inscrit à l’interface de la signalisation métabolique et des processus du développement, et des altérations de son expression ont été associées à une prolifération dérégulée, à des états transcriptionnels liés à l’inflammation et à la biologie tumorale dans de multiples contextes tissulaires. Ces caractéristiques font de NR5A2 un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel du métabolisme, l’engagement de lignée et des circuits de régulation pertinents pour les maladies.

NR5A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR5A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NR5A2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR5A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR5A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NR5A2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR5A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NR5A2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NR5A2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR5A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.