NR3A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403378

Übersicht

GRIN3A kodiert die humane NR3A‑Untereinheit der N‑Methyl‑D‑Aspartat‑(NMDA‑)Rezeptoren, eines durch Glutamat aktivierten Ionenkanal-Komplexes, der synaptische Transmission und neuronale Erregbarkeit mitprägt. Der Einbau von NR3A in NMDA‑Rezeptoren verändert die Kanaleigenschaften, darunter eine verringerte Ca2+-Permeabilität und ein modifizierter Mg2+-Block, und beeinflusst damit aktivitätsabhängige synaptische Umgestaltung und Plastizität. Die GRIN3A‑Expression ist entwicklungsabhängig reguliert und wird mit Prozessen wie dem Erregungs-/Hemmungs-Gleichgewicht, der dendritischen Reifung und der Verfeinerung neuronaler Schaltkreise in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte Zusammensetzung von NMDA‑Rezeptoruntereinheiten, einschließlich veränderter NR3A‑Spiegel, wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen assoziiert und stützt seine Verwendung in mechanistischen Studien der synaptischen Signalübertragung.

Das NR3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRIN3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRIN3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRIN3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NR3A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRIN3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NR3A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRIN3A-Exone abzielen, die für die NR3A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRIN3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NR3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NR3A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRIN3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NR3A HDR-Plasmid (h) und NR3A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRIN3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRIN3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.