NR3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403378

概要

GRIN3A は、グルタミン酸によって開口するイオンチャネル複合体であり、シナプス伝達や神経細胞の興奮性を形作る N-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）受容体のヒト NR3A サブユニットをコードします。NR3A が NMDA 受容体に取り込まれると、Ca2+ 透過性の低下や Mg2+ ブロックの変化など、チャネル特性が変わり、活動依存的なシナプスの再編や可塑性に影響を及ぼします。GRIN3A の発現は発達段階に応じて制御されており、興奮性／抑制性バランス、樹状突起の成熟、回路の洗練化といった過程に関与するとされています。NR3A の量の変化を含む NMDA 受容体サブユニット構成の異常は、神経発達および神経精神疾患様の表現型と関連づけられており、シナプスシグナル伝達の機序研究における標的としての有用性が支持されています。

NR3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRIN3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRIN3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRIN3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NR3Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NR3Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRIN3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NR3Aの機能に不可欠なGRIN3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRIN3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NR3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNR3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRIN3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NR3A HDRプラスミド（h）および NR3A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRIN3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRIN3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。