NPY4-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406230

Übersicht

NPY4R kodiert den Neuropeptid‑Y‑Rezeptor Y4 (NPY4‑R), einen Gi/o‑gekoppelten GPCR, der bevorzugt durch das pankreatische Polypeptid aktiviert wird und die cAMP‑Signalübertragung, die Aktivität von Ionenkanälen sowie nachgeschaltete MAPK/ERK‑Signalwege moduliert. NPY4‑R wird in peripheren Geweben und in ausgewählten Regionen des ZNS exprimiert und verknüpft neuroendokrine Signale mit der Regulation von Fressverhalten, Energiebilanz, gastrointestinaler Motilität und autonomer Kontrolle. Die Rezeptoraktivierung beeinflusst die zelluläre Erregbarkeit und sekretorische Programme durch Hemmung der Adenylylcyclase und βγ‑vermittelte Signalgebung. Veränderte NPY4R‑Signalgebung wurde im Zusammenhang mit der Stoffwechselphysiologie, adipositasbezogenen Merkmalen und der funktionellen Regulation des Gastrointestinaltrakts untersucht und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Analyse neuropeptidgetriebener homöostatischer Schaltkreise.

Das NPY4-R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NPY4R-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NPY4R-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NPY4R nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NPY4-R-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NPY4R-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NPY4-R-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NPY4R-Exone abzielen, die für die NPY4-R-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NPY4R-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NPY4-R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NPY4-R CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NPY4R-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NPY4-R HDR-Plasmid (h) und NPY4-R HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NPY4R-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NPY4R-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.