NPY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401098
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- NPY Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im NPY-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NPY: sc-133080
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NPY CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401098 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Neuropeptid Y (NPY) kodiert ein sezerniertes Neuropeptid aus 36 Aminosäuren, das über G‑Protein‑gekoppelte Y‑Rezeptoren signalisiert und so die Neurotransmission, die neuroendokrine Sekretion sowie die autonome Kontrolle der Energiebilanz reguliert. Die NPY‑Aktivität ist an Gi/o‑vermittelte Signalwege gekoppelt und moduliert cAMP‑Spiegel, Calciumflüsse und nachgeschaltete Kinase‑Signalwege, die die neuronale Erregbarkeit, synaptische Plastizität und schaltkreisbezogene Mechanismen der Appetitregulation beeinflussen. Über das zentrale Nervensystem hinaus trägt NPY zu Stressreaktionen, zum Gefäßtonus und zum Verhalten von Immunzellen bei und ist damit mit Prozessen wie Entzündung und metabolischer Homöostase verknüpft. Eine fehlregulierte NPY‑Signalgebung wurde unter anderem im Zusammenhang mit Adipositas und Stoffwechselerkrankungen, angst‑ und stressbezogenen Phänotypen sowie neurodegenerativen oder neuroinflammatorischen Erkrankungen untersucht.
Das NPY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NPY-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NPY-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NPY nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NPY-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NPY-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NPY-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf NPY-Exone abzielen, die für die NPY-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere NPY-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom NPY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NPY CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NPY-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NPY HDR-Plasmid (h) und NPY HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NPY-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NPY-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.