NPR-A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401737-ACT

Humanes **NPR1** kodiert den natriuretischen Peptidrezeptor A (NPR-A), eine einzelpassige transmembrane Guanylylcyclase, die atriale und Gehirn‑natriuretische Peptide bindet, um cGMP zu erzeugen. Die NPR-A‑Signalübertragung aktiviert cGMP‑abhängige Effektoren wie PKG und moduliert Ionentransport, vasodilatatorischen Tonus sowie transkriptionelle Programme, die die kardiovaskuläre und renale Homöostase regulieren. Über den cGMP‑Umsatz und Crosstalk mit Stickstoffmonoxid‑ und Phosphodiesterase‑Signalwegen beeinflusst NPR1 zelluläre Wachstumsantworten und die Umgestaltung der extrazellulären Matrix. Eine veränderte NPR1/NPR-A‑Aktivität wurde mit einer dysregulierten Blutdruckkontrolle, kardialer Hypertrophie und kardiorenaler Pathophysiologie in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien der kardiometabolischen Signalübertragung unterstreicht.

NPR-A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NPR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NPR-A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NPR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NPR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NPR-A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NPR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NPR-A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NPR-A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NPR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.