NPM3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421944

Übersicht

Das Mausgen **Npm3** kodiert **Nucleophosmin/Nucleoplasmin 3 (NPM3)**, ein nukleoläres Protein, das an der Ribosomenbiogenese und der Homöostase des Nukleolus beteiligt ist, unter anderem durch die Regulation der rRNA-Prozessierung und der Ribonukleoprotein-Assemblierung. NPM3 wirkt zudem an chromatinassoziierten Prozessen sowie an nukleozytoplasmatischen Dynamiken mit, indem es mit weiteren nukleolären Faktoren interagiert, und verknüpft so die Funktion des Nukleolus mit Zellzyklusprogression und Stressantworten. Störungen nukleolärer Proteine in diesem Signalweg können die Proliferationskontrolle, die genomische Stabilität und Transkriptionsprogramme beeinflussen, die für onkogene Transformation und die Biologie hämatologischer Malignome relevant sind. Als Bestandteil eines nukleolären Gerüstes bietet NPM3 einen nützlichen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie die Integrität des Nukleolus Wachstumssignale und die zelluläre Anpassung an proteotoxischen oder genotoxischen Stress moduliert.

Das NPM3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Npm3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Npm3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Npm3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NPM3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Npm3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NPM3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Npm3-Exone abzielen, die für die NPM3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Npm3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NPM3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NPM3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Npm3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NPM3 HDR-Plasmid (m) und NPM3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Npm3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Npm3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.