NPDC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421942

Übersicht

Npdc1 kodiert NPDC-1, ein mit der neuronalen und glialen Differenzierung assoziiertes Protein, das an der Kontrolle der Zellzyklusprogression und von Reifungsprogrammen im Nervensystem beteiligt ist. NPDC-1 wurde mit der Regulation des Übergangs von Proliferation zu Differenzierung in Verbindung gebracht; beschrieben sind Interaktionen, die transkriptionelle Outputs sowie wachstumsregulierende Signalwege in neuralen Zelllinien beeinflussen. In Mausmodellen und neuronalen Zellsystemen wird eine veränderte NPDC-1-Aktivität genutzt, um Mechanismen des Neuritenauswuchses, der neuronalen Plastizität und der Linienspezifikation zu untersuchen. Eine Fehlregulation dieser Prozesse ist relevant für neuroentwicklungsbedingte Auffälligkeiten sowie für zelluläre Zustände, die mit aberranter Proliferation im Nervengewebe einhergehen.

Das NPDC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Npdc1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Npdc1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Npdc1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NPDC-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Npdc1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NPDC-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Npdc1-Exone abzielen, die für die NPDC-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Npdc1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NPDC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NPDC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Npdc1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NPDC-1 HDR-Plasmid (m) und NPDC-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Npdc1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Npdc1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.