NPC1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401741

Übersicht

NPC1L1 (Niemann-Pick C1-like 1) ist ein Mehrfach-Transmembranprotein, das die zelluläre Aufnahme von Cholesterin aus der Nahrung und aus der Galle sowie anderer Sterole vermittelt. Es wirkt an der Plasmamembran und in endozytotischen Transportkompartimenten. NPC1L1 ist an der Sterol-Sensorik und an vesikulären Transportprozessen beteiligt, die die intrazelluläre Lipidhomöostase und den Umgang mit Lipoproteinen beeinflussen. Die NPC1L1-Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die die Cholesterinabsorption, die Membranzusammensetzung und lipidabhängige Signalübertragung steuern. Eine Fehlregulation des NPC1L1-assoziierten Steroltransports ist relevant für metabolische Phänotypen, die mit einem veränderten Cholesteringleichgewicht und lipidgetriebenen Entzündungszuständen zusammenhängen.

Das NPC1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NPC1L1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NPC1L1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NPC1L1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NPC1L1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NPC1L1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NPC1L1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NPC1L1-Exone abzielen, die für die NPC1L1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NPC1L1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NPC1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NPC1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NPC1L1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NPC1L1 HDR-Plasmid (h) und NPC1L1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NPC1L1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NPC1L1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.