Plásmido CRISPR de Activación (m) NPAT: sc-434105-ACT

El gen **Npat** de ratón codifica **NPAT**, un cofactor nuclear que vincula la progresión del ciclo celular con la transcripción de genes de histonas y la dinámica de la cromatina. NPAT se activa aguas abajo de **ciclina E/CDK2** y se localiza en los **cuerpos del locus de histonas**, donde favorece la expresión acoplada a la fase S de histonas dependientes de la replicación y coordina la replicación del ADN y el mantenimiento del genoma. A través de estas funciones, NPAT contribuye a vías que gobiernan la transición **G1/S**, la incorporación de nucleótidos y el ensamblaje de la cromatina, procesos que a menudo se ven alterados en situaciones de estrés proliferativo y en cambios del estado celular asociados a enfermedad. Por lo tanto, modular la expresión de **Npat** resulta útil para dilucidar cómo la señalización del ciclo celular se integra con programas transcripcionales que controlan la estabilidad del genoma.

NPAT El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Npat sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NPAT El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Npat en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Npat, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NPAT. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Npat y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NPAT en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NPAT en células tumorales con expresión de Npat silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.