Particules Lentivirales d'Activation (m) NPAS4: sc-432569-LAC

Le gène murin **Npas4** code **NPAS4**, un facteur de transcription bHLH-PAS dépendant de l’activité, qui couple l’excitation neuronale à des programmes géniques contrôlant le développement des synapses inhibitrices et l’équilibre excitation–inhibition. NPAS4 est induit par la signalisation calcique et participe à des réseaux transcriptionnels qui façonnent la plasticité synaptique, le raffinage des circuits et les réponses homéostatiques aux modifications de l’activité neuronale. En régulant des cibles en aval liées à la modulation des synapses GABAergiques et à la transcription dépendante des stimuli, NPAS4 influence la réactivité au stress, la plasticité liée à l’apprentissage et l’adaptation métabolique dans les tissus neuraux. Des dérégulations des voies associées à NPAS4 ont été étudiées dans le contexte des mécanismes des maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, notamment une excitabilité des réseaux altérée et des troubles des fonctions cognitives.

Les particules d'activation lentivirales NPAS4 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Npas4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NPAS4 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Npas4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NPAS4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Npas4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.