Plasmide CRISPR d'Activation (m) NPAS4: sc-432569-ACT

Le gène murin Npas4 code la protéine 4 à domaine PAS neuronal (NPAS4), un facteur de transcription bHLH-PAS dépendant de l’activité qui relie l’influx de calcium à des programmes géniques contrôlant le développement des synapses inhibitrices et l’équilibre excitation–inhibition. NPAS4 régule des réseaux transcriptionnels impliqués dans la plasticité synaptique, l’affinement des circuits et le remodelage induit par les stimuli, en intégrant des signaux issus de la dépolarisation neuronale et des voies en aval associées à CREB. Une expression altérée de NPAS4 a été associée, dans des contextes de recherche, à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, notamment des adaptations comportementales liées au stress, une susceptibilité aux crises et des troubles cognitifs, soulignant son importance pour les mécanismes de stabilité des réseaux. En tant que régulateur de réponse précoce rapide, NPAS4 est largement utilisé pour étudier comment l’activité neuronale remodèle les états transcriptionnels et la connectivité synaptique.

NPAS4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Npas4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NPAS4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Npas4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Npas4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NPAS4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Npas4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NPAS4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NPAS4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Npas4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.