NP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421951

Übersicht

Neuronal Pentraxin 1 (Nptx1; NP1) ist ein sezerniertes neuronales Pentraxin, das an exzitatorischen Synapsen angereichert ist und dort zum aktivitätsabhängigen Umbau von Synapsen sowie zur Organisation der glutamatergen Signalübertragung beiträgt. NP1 ist an extrazellulären Proteinnetzwerken beteiligt, die die Clusterbildung von AMPA-Rezeptoren und die synaptische Stabilisierung beeinflussen, und verknüpft neuronale Aktivität mit der Verfeinerung von Schaltkreisen und synaptischer Plastizität. In Mausmodellen wurde die Regulation von Nptx1 mit Prozessen wie Synaptogenese, Neuritenauswachsung und calciumabhängigen Signalkaskaden in Verbindung gebracht, die erfahrungsabhängige Konnektivität formen. Eine veränderte NP1-Expression und Dynamiken im neuronalen-Pentraxin-Signalweg wurden mit neurodegenerations- und anfallsbezogenen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Untersuchungen synaptischer Dysfunktion unterstreicht.

Das NP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nptx1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nptx1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nptx1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nptx1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nptx1-Exone abzielen, die für die NP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nptx1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nptx1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NP1 HDR-Plasmid (m) und NP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nptx1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nptx1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.