Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nova-2: sc-404452-ACT

Le gène humain **NOVA2** code Nova-2, une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les neurones, qui reconnaît les motifs YCAY afin de réguler l’épissage alternatif et d’autres événements de maturation post‑transcriptionnelle de l’ARN. Nova-2 façonne la différenciation neuronale et la fonction synaptique en coordonnant l’inclusion et l’exclusion d’exons au sein de réseaux de transcrits impliqués dans la croissance des neurites, la dynamique du cytosquelette et la neurotransmission. Grâce à ces programmes d’épissage, **NOVA2** contribue au maintien de l’intégrité des circuits neuronaux et à la régulation de l’expression génique dépendante de l’activité. Une dérégulation ou des variations pathogènes de **NOVA2** ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des dysfonctions neurologiques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du traitement de l’ARN dans le système nerveux.

Nova-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOVA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nova-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOVA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOVA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nova-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOVA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nova-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nova-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOVA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.