nov CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402642-ACT

Human NOV (nephroblastoma overexpressed; CCN3) kodiert das sezernierte matrizelluläre Protein Nov, ein Mitglied der CCN-Familie, das die Zell–Matrix-Kommunikation und die Signalübertragung durch Wachstumsfaktoren moduliert. Nov beeinflusst den Umbau der extrazellulären Matrix, Zelladhäsion und -migration sowie Differenzierungsprogramme durch Interaktionen mit Integrinen, Heparansulfat-Proteoglykanen und Signalwegen, die mit TGF-β, Wnt/β-Catenin und Notch assoziiert sind. Indem NOV stromale und inflammatorische Mikroumgebungen mitprägt, wird seine Expression häufig im Zusammenhang mit Fibrose, Gewebereparatur und Tumorbiologie untersucht. Eine dysregulierte NOV-Expression wurde bei mehreren malignen Erkrankungen und Bindegewebsstörungen beschrieben, was ihre Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für Signalweg- und Phänotypstudien in menschlichen Zellen unterstreicht.

nov Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NOV-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

nov Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NOV-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NOV-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen nov-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NOV-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von nov-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des nov-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NOV-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.