Plásmido Doble Nickase (m) Notch1: sc-421930-NIC

El gen Notch1 de ratón codifica un receptor transmembrana de paso único que media la señalización canónica de Notch para controlar decisiones de destino celular, el mantenimiento de células madre y progenitoras, y programas de diferenciación durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La unión del ligando desencadena el procesamiento proteolítico y la liberación del dominio intracelular de Notch, que se transloca al núcleo y coopera con RBPJ/CSL y coactivadores como MAML para regular redes de transcripción, incluidos los genes diana de las familias HES y HEY. Notch1 se integra con vías que gobiernan la proliferación, la apoptosis y el compromiso de linaje, y su desregulación se asocia con alteraciones en el desarrollo de células inmunitarias y procesos tumorogénicos en múltiples tejidos. En modelos murinos, la perturbación de Notch1 se utiliza ampliamente para investigar fenotipos del desarrollo, la regulación hematopoyética y las señales del microambiente que moldean la organización tisular.

Notch1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Notch1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Notch1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Notch1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Notch1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.