Notch 4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400766-ACT

Humanes **NOTCH4** kodiert **Notch 4**, einen einschleusigen Transmembranrezeptor, der juxtakrines Signaling vermittelt und dadurch Zellschicksalsentscheidungen, Linienfestlegung und Gewebehomöostase reguliert. Nach Ligandenbindung führt proteolytische Prozessierung zur Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne, die in den Zellkern transloziert und dort zusammen mit CSL/RBPJ und Koaktivatoren Transkriptionsprogramme steuert, die Proliferation und Differenzierung bestimmen. Die NOTCH4-Aktivität ist eng in entwicklungsbiologische und gefäßassoziierte Prozesse eingebunden und kann mit Signalwegen wie WNT, TGF‑β und inflammatorischer Signalgebung interagieren, um endotheliale und Immunzell-Phänotypen zu prägen. Eine fehlregulierte Notch‑4-Signalübertragung wurde mit veränderten angiogenen Antworten und tumorassoziierten Mikroumgebungszuständen in Verbindung gebracht, wodurch sie für mechanistische Studien der Onkogenese sowie der vaskulären Biologie relevant ist.

Notch 4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NOTCH4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Notch 4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NOTCH4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NOTCH4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Notch 4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NOTCH4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Notch 4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Notch 4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NOTCH4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.