NOR-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401813-ACT

NR4A3 kodiert NOR-1, einen verwaisten nukleären Rezeptor, der als Immediate-Early-Transkriptionsfaktor wirkt und mitogene sowie Stresssignale in kontextabhängige Genprogramme integriert. NOR-1 beeinflusst die zelluläre Differenzierung, Proliferation, Apoptose und metabolische Anpassung, indem es transkriptionelle Netzwerke downstream von Signalwegen wie MAPK/ERK und cAMP/PKA moduliert, mit Crosstalk zu entzündlichen Signalwegen. In Immun- und Gefäßzellen trägt NR4A3 zur Regulation zytokinantwortiver Genexpression und zum phänotypischen Switching bei und unterstützt damit Studien zu Entzündung, Angiogenese und Gewebeumbau. Eine veränderte NR4A3-Aktivität und transkriptionelles Rewiring wurden mit onkogenen und hämatologischen Prozessen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung krankheitsrelevanter genregulatorischer Schaltkreise macht.

NOR-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NR4A3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NOR-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NR4A3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NR4A3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NOR-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NR4A3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NOR-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NOR-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NR4A3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.