NOP2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409656-ACT

Das humane Gen NOP2 kodiert eine nukleoläre RNA-Methyltransferase, die über die Modifikation und Reifung von rRNA an der Ribosomenbiogenese beteiligt ist und dadurch den Zusammenbau der großen ribosomalen Untereinheit sowie eine effiziente Proteinsynthese unterstützt. Die Aktivität von NOP2 ist eng mit der Funktion des Nukleolus, dem Fortschreiten des Zellzyklus und proliferativen Wachstumsprogrammen verknüpft, was seine Rolle bei der Abstimmung der translationalen Kapazität auf den zellulären Bedarf widerspiegelt. Eine dysregulierte NOP2-Expression sowie Signaturen von nukleolärem Stress wurden in mehreren Tumorkontexten beschrieben, in denen eine veränderte Ribosomenproduktion und Translationskontrolle zu onkogenen Phänotypen beitragen. Daher wird NOP2 häufig in Signalwegen untersucht, die rRNA-Prozessierung, chromatinassoziierte transkriptionelle Regulation und Proteostase miteinander verbinden.

NOP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NOP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NOP2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NOP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NOP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NOP2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NOP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NOP2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NOP2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NOP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.