NOP17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407256

Übersicht

PIH1D1 kodiert NOP17, einen konservierten Ko-Chaperon innerhalb des R2TP-Komplexes, der mit HSP90 zusammenarbeitet, um die Biogenese, Stabilisierung und Assemblierung großer makromolekularer Maschinen zu fördern. NOP17 unterstützt die Reifung von Box‑C/D‑snoRNPs, trägt zur Ribosomenbiogenese und nukleolären Homöostase bei und hilft beim Zusammenbau zentraler Komplexe wie der RNA‑Polymerase II und PIKK-haltiger Signalmodule. Über diese Funktionen verknüpft PIH1D1 die chaperonvermittelte Qualitätskontrolle mit RNA‑Prozessierung, Proteostase und stressresponsiven Signalwegen. Eine Fehlregulation der R2TP/HSP90-abhängigen Assemblierung und der Biogenese von Ribonukleoproteinen wurde mit veränderter Wachstumskontrolle und Phänotypen der Genomstabilität in Verbindung gebracht, die für die mechanistische Krankheitsforschung relevant sind.

Das NOP17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PIH1D1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PIH1D1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PIH1D1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NOP17-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PIH1D1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NOP17-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PIH1D1-Exone abzielen, die für die NOP17-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PIH1D1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NOP17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NOP17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PIH1D1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NOP17 HDR-Plasmid (h) und NOP17 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PIH1D1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PIH1D1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.