Plasmide CRISPR d'Activation (h) NOD1: sc-402402-ACT

NOD1 (domaine d’oligomérisation liant les nucléotides contenant 1) est un récepteur cytosolique de reconnaissance des motifs (PRR) qui détecte des muropeptides dérivés du peptidoglycane, en particulier l’acide γ-D-glutamyl-méso-diaminopimélique provenant de bactéries Gram négatif. Après reconnaissance du ligand, NOD1 signale via RIPK2 pour activer les voies NF-κB et MAPK, favorisant la transcription de médiateurs inflammatoires et modulant la barrière épithéliale ainsi que les réponses de l’immunité innée. NOD1 interagit également avec l’autophagie, la signalisation du stress et les interactions hôte–microbiome, qui influencent la survie cellulaire et l’homéostasie immunitaire. Une activité dérégulée de NOD1 a été associée à des états inflammatoires chroniques et à des pathologies liées aux infections, ce qui justifie son étude dans les réseaux de signalisation immunitaire et les modèles d’inflammation pertinents pour les maladies.

NOD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NOD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NOD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NOD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NOD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NOD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.