Nocturnin Lentiviral Activation Particles (h): sc-405350-LAC

Das menschliche **NOCT**-Gen kodiert **Nocturnin**, eine zirkadian regulierte, CCR4-ähnliche Deadenylase, die die Länge des Poly(A)-Schwanzes von mRNAs moduliert und dadurch die Transkriptstabilität und Translation tageszeitabhängig steuert. Nocturnin integriert Signale der zirkadianen Uhr mit Stoffwechselprogrammen und beeinflusst in unterschiedlichen Zelltypen den Lipidstoffwechsel, die mitochondriale Funktion sowie die nährstoffabhängige Genexpression. Über posttranskriptionelle Regulation prägt es Signalwege, die mit Energiehomöostase, inflammatorischer Signalübertragung und zellulärer Anpassung an Stress verknüpft sind. Eine fehlregulierte NOCT-Expression oder -Aktivität wurde in krankheitsrelevanten Kontexten mit metabolischen Phänotypen und einer veränderten Wachstumskontrolle in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien dazu motiviert, wie rhythmischer RNA-Umsatz die Pathologie beeinflusst.

Nocturnin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NOCT-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Nocturnin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NOCT-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Nocturnin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NOCT-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.