NNT Lentiviral Activation Particles (h): sc-402908-LAC

Humanes NNT (Nicotinamid-Nukleotid-Transhydrogenase) ist ein Enzym der inneren Mitochondrienmembran, das die protonenmotorische Kraft mit der Hydridübertragung zwischen NAD(H) und NADP(H) koppelt und so mitochondriale NADPH-Pools aufrechterhält. Durch die Unterstützung glutathion- und thioredoxinabhängiger antioxidativer Systeme trägt NNT zur Aufrechterhaltung der Redoxhomöostase bei, begrenzt die Anreicherung reaktiver Sauerstoffspezies und stabilisiert die mitochondriale Bioenergetik. Die NNT-Aktivität ist mit der oxidativen Phosphorylierung, dem mitochondrialen Stoffwechsel und Stressantwort-Signalwegen verknüpft, die Apoptose und inflammasomenassoziierte Prozesse beeinflussen. Eine dysregulierte NNT-Funktion wurde in der Literatur mit einem veränderten mitochondrialen Redoxgleichgewicht und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für kardiometabolische Dysfunktionen und die endokrine Stressbiologie relevant sind, was NNT zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur mitochondrialen Resilienz macht.

NNT Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NNT-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NNT Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NNT-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NNT-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NNT-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.