Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NNT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421922
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- NNT El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico NNT, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NNT Anticuerpo (B-3): sc-390236
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
NNT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421922 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Nnt del ratón codifica la transhidrogenasa de nucleótidos de nicotinamida (NNT), una enzima de la membrana interna mitocondrial que acopla la fuerza protón‑motriz a la transferencia de hidruro entre NAD(H) y NADP(H). Al generar NADPH mitocondrial, NNT sostiene los sistemas antioxidantes dependientes de glutatión y tioredoxina y ayuda a mantener la homeostasis redox durante la fosforilación oxidativa. La actividad de NNT influye en el metabolismo mitocondrial, el manejo de especies reactivas de oxígeno y la susceptibilidad a disfunciones impulsadas por el estrés oxidativo. La alteración de la función de Nnt/NNT se ha relacionado con fenotipos metabólicos y respuestas al estrés deterioradas, por lo que es relevante para estudios de bioenergética mitocondrial y señalización regulada por el estado redox.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO NNT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nnt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nnt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nnt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NNT.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nnt para la investigación de la señalización de NNT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Nnt críticos para la función de NNT
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nnt para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido NNT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NNT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nnt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NNT (m) y el plásmido HDR NNT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nnt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nnt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.