NMUR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405595-ACT

Neuromedin-U-Rezeptor 1 (NMUR1) ist ein G‑Protein-gekoppelter Rezeptor der Klasse A, der das Neuropeptid Neuromedin U bindet und vor allem an die Gq/11‑Signalübertragung koppelt, wodurch intrazelluläres Ca²⁺ ansteigt und nachgeschaltete, MAPK‑ und PKC‑abhängige Transkriptionsprogramme aktiviert werden. NMUR1 wird in Immun- und peripheren Geweben exprimiert, wo er inflammatorische Signalwege, die Zytokinproduktion, die Kontraktilität glatter Muskulatur und die neuroendokrine Kommunikation moduliert. Über diese Signalwege wurde NMUR1 in Mechanismen untersucht, die die neuroimmune Regulation mit der Atemwegs- und Gastrointestinalphysiologie sowie der systemischen metabolischen Homöostase verknüpfen. Eine fehlregulierte NMUR1‑Signalgebung wurde in Forschungszusammenhängen mit entzündlichen Erkrankungen und veränderten metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was NMUR1 zu einem nützlichen Ziel für die Aufklärung von Signalwegen in relevanten Zellmodellen macht.

NMUR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NMUR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NMUR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NMUR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NMUR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NMUR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NMUR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NMUR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NMUR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NMUR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.