NMT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421916

Panoramica

Il gene murino Nmt1 codifica la N‑miristoiltransferasi 1 (NMT1), un enzima chiave che catalizza la N‑miristoilazione co- e post-traduzionale di proteine che presentano una glicina all’estremità N-terminale. Questa modificazione lipidica regola l’associazione alle membrane, la stabilità proteica e la propagazione dei segnali per numerosi substrati, influenzando processi quali il traffico vescicolare, la dinamica del citoscheletro, l’apoptosi e la segnalazione dell’immunità innata. L’attività di NMT1 si interseca con vie controllate da chinasi della famiglia Src e da piccole GTPasi, modulando la crescita cellulare e le risposte allo stress. Una miristoilazione proteica deregolata è stata associata a stati di segnalazione oncogenica e a fenotipi immunitari e neuronali alterati, rendendo Nmt1 un nodo di grande interesse per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NMT1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nmt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nmt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nmt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NMT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nmt1 per lo studio della segnalazione di NMT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nmt1 critici per la funzione di NMT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nmt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nmt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NMT1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NMT1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nmt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nmt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.