Plasmide CRISPR d'Activation (h) NMNAT-3: sc-403839-ACT

NMNAT3 code la nicotinamide mononucléotide adénylyltransférase 3 (NMNAT-3), une enzyme clé de la biosynthèse du NAD qui catalyse la conversion du NMN et de l’ATP en NAD. Dans les cellules humaines, NMNAT-3 est principalement associée au maintien du pool mitochondrial de NAD, ce qui la relie à l’homéostasie redox, à la phosphorylation oxydative et à l’adaptation métabolique en situation de stress. En modulant la disponibilité du NAD, NMNAT-3 influence les voies de signalisation dépendantes des sirtuines et des PARP, la résilience mitochondriale et les réponses cellulaires aux dommages oxydatifs. La dérégulation du métabolisme du NAD et la dysfonction mitochondriale impliquent la biologie liée à NMNAT3 dans des études sur la neurodégénérescence, le stress cardiométabolique et les déclins de la production d’énergie associés au vieillissement.

NMNAT-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NMNAT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NMNAT-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NMNAT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NMNAT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NMNAT-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NMNAT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NMNAT-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NMNAT-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de NMNAT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.