NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-426032-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NMNAT-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und NMNAT-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nmnat1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-426032-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-426032-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Nmnat1** kodiert die Nicotinamid-Mononukleotid-Adenylyltransferase 1 (NMNAT-1), ein nukleäres Enzym, das den letzten Schritt der NAD⁺-Biosynthese aus NMN und ATP katalysiert. Durch die Aufrechterhaltung nukleärer NAD⁺-Pools unterstützt NMNAT-1 die Redox-Homöostase und versorgt NAD⁺-abhängige Prozesse, darunter PARP-vermittelte DNA-Schadensantworten sowie sirtuinregulierte Programme der Chromatinorganisation und Transkriptionskontrolle. Die Aktivität von Nmnat1 verknüpft den Stoffwechselzustand mit Signalwegen zur Genomstabilität und beeinflusst damit die Stressresilienz von Zellen und die neuronale Integrität. Eine Dysregulation des NMNAT-1–abhängigen NAD⁺-Stoffwechsels ist relevant für Studien zu Neurodegeneration, Axonerhalt und DNA-Reparatur-assoziierten Krankheitsmechanismen.
NMNAT-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nmnat1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nmnat1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nmnat1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nmnat1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.