Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403085-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NMNAT-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und NMNAT-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NMNAT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NMNAT-1: sc-271557
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403085-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMNAT-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403085-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes NMNAT1 kodiert die Nicotinamid-Mononukleotid-Adenylyltransferase 1 (NMNAT-1), ein nukleäres Enzym, das den letzten Schritt der NAD⁺-Biosynthese aus NMN und ATP katalysiert. Durch die Aufrechterhaltung nukleärer NAD⁺-Pools unterstützt NMNAT-1 NAD⁺-abhängige Prozesse, darunter PARP-vermittelte DNA-Schadensantworten, sirtuinregulierte Chromatindynamik sowie eine transkriptionelle Kontrolle, die mit zellulärem Stress und Stoffwechsel verknüpft ist. Die Aktivität von NMNAT1 überschneidet sich mit Signalwegen der Redox-Homöostase und der Genomstabilität, die die neuronale Viabilität und den Energiehaushalt beeinflussen. Eine genetische Störung von NMNAT1 wurde mit erblich bedingter retinaler Degeneration und verwandten neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der NAD⁺-Biologie in krankheitsrelevanten Modellen macht.
NMNAT-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NMNAT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NMNAT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NMNAT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NMNAT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.