NMDAε2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400654-ACT

GRIN2B kodiert die humane NMDA‑Rezeptoruntereinheit NMDAε2 (GluN2B), eine Komponente eines glutamatgesteuerten Ionenkanals, die den Ca²⁺‑Einstrom während exzitatorischer Neurotransmission reguliert. Rezeptoren, die NMDAε2 enthalten, prägen die synaptische Plastizität, die aktivitätsabhängige Genexpression und die neuronale Entwicklung durch Kopplung an CaMK/CREB‑Signalwege, MAPK‑Kaskaden und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme. Die GRIN2B‑Funktion ist eng mit dem exzitatorisch‑inhibitorischen Gleichgewicht, der Reifung dendritischer Spines und der Verschaltungsausreifung im zentralen Nervensystem verknüpft. Eine veränderte GRIN2B‑Expression oder NMDA‑Rezeptor‑Signalgebung wurde mit Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter kognitive Dysfunktionen, epilepsieassoziierte Phänotypen und Synaptopathien.

NMDAε2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GRIN2B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NMDAε2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GRIN2B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GRIN2B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NMDAε2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GRIN2B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NMDAε2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NMDAε2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GRIN2B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.