NMDAε1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400963

Übersicht

GRIN2A kodiert die NMDA-Rezeptoruntereinheit NMDAε1 (GluN2A), eine Komponente eines glutamatgesteuerten Ionenkanals, die sich mit anderen NMDA-Rezeptoruntereinheiten zusammenlagert, um eine Ca²⁺-permeable exzitatorische Neurotransmission zu vermitteln. Diese Untereinheit trägt zur Festlegung der Rezeptorkinetik und der Stärke der synaptischen Signalübertragung bei und unterstützt aktivitätsabhängige Prozesse der synaptischen Plastizität wie die Langzeitpotenzierung und die Langzeitdepression. NMDAε1 ist an postsynaptischen Signalnetzwerken beteiligt, die den Ionenfluss mit CaMK/CREB-abhängigen Transkriptionsprogrammen sowie einer umfassenderen Homöostase exzitatorischer/inhibitorischer Schaltkreise koppeln. Genetische Varianten oder eine Fehlregulation von GRIN2A wurden mit neuroentwicklungsbedingten und Epilepsie-Spektrum-Phänotypen in Verbindung gebracht und im Kontext synaptischer Dysfunktionen untersucht, die für Mechanismen neurologischer Erkrankungen relevant sind.

Das NMDAε1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRIN2A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRIN2A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRIN2A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NMDAε1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRIN2A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NMDAε1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRIN2A-Exone abzielen, die für die NMDAε1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRIN2A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NMDAε1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NMDAε1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRIN2A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NMDAε1 HDR-Plasmid (h) und NMDAε1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRIN2A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRIN2A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.