nm23-H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416164

概要

NME1-NME2はnm23-H2をコードしており、nm23-H2はNTPとNDP間のリン酸基転移を触媒することで細胞内ヌクレオチド恒常性の維持に寄与するヌクレオシド二リン酸キナーゼです。代謝上の役割にとどまらず、nm23-H2は増殖・分化・ストレス応答に関連するシグナル伝達ネットワークや遺伝子発現制御にも関与し、核内での核酸結合や転写制御といった機能が報告されています。NME1/NME2の活性や発現パターンの変化は、複数のがん種において腫瘍進展や転移性挙動と関連づけられており、浸潤や細胞状態遷移の機構研究における有用な解析ノードとなっています。ヒト細胞では、nm23-H2は細胞骨格の再編成や細胞運動性に関わる経路との関連でも研究されており、遊走表現型に影響を与えることが示唆されています。

nm23-H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNME1-NME2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NME1-NME2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NME1-NME2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、nm23-H2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、nm23-H2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NME1-NME2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• nm23-H2の機能に不可欠なNME1-NME2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NME1-NME2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• nm23-H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびnm23-H2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NME1-NME2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  nm23-H2 HDRプラスミド（h）および nm23-H2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNME1-NME2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNME1-NME2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。