nm23-H2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416164

Descripción general

NME1-NME2 codifica nm23-H2, una quinasa de nucleósidos difosfato que ayuda a mantener la homeostasis celular de nucleótidos al catalizar la transferencia de fosfato entre NTP y NDP. Más allá de su función metabólica, nm23-H2 participa en la regulación de la expresión génica y de redes de señalización vinculadas a la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés, con funciones descritas en la unión a ácidos nucleicos y el control transcripcional en el núcleo. Los cambios en la actividad y los patrones de expresión de NME1/NME2 se han asociado con la progresión tumoral y el comportamiento metastásico en múltiples contextos de cáncer, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de invasión y transiciones de estado celular. En células humanas, nm23-H2 también se estudia en relación con la remodelación del citoesqueleto y las vías de motilidad que influyen en los fenotipos de migración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO nm23-H2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NME1-NME2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NME1-NME2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NME1-NME2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína nm23-H2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NME1-NME2 para la investigación de la señalización de nm23-H2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NME1-NME2 críticos para la función de nm23-H2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NME1-NME2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido nm23-H2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido nm23-H2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NME1-NME2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR nm23-H2 (h) y el plásmido HDR nm23-H2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NME1-NME2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NME1-NME2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.