Plásmido Doble Nickase (h) nm23-H1: sc-401221-NIC

NME1 codifica nm23-H1, una quinasa de difosfato de nucleósidos expresada de forma ubicua que regula la homeostasis de nucleótidos celulares y participa en la transducción de señales, la remodelación del citoesqueleto y el tráfico de membranas. Más allá de su actividad enzimática, nm23-H1 se ha vinculado al control de la motilidad celular, la diferenciación y las respuestas al estrés mediante interacciones con vías de pequeñas GTPasas y redes de quinasas. La alteración de la expresión y la función de NME1 se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo y el potencial metastásico en múltiples contextos tumorales, y se estudia con frecuencia en relación con la proliferación y fenotipos asociados al daño del ADN. Estas características hacen de NME1 una diana útil para desentrañar mecanismos de migración, estabilidad genómica y comunicación cruzada entre vías en células humanas.

nm23-H1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NME1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NME1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NME1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NME1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.