NLP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406794

Übersicht

NINL kodiert das Ninein-like-Protein (NLP), einen mit Zentrosomen und Mikrotubuli assoziierten Faktor, der die Organisation der Zentrosomen, die Verankerung von Mikrotubuli sowie die für den intrazellulären Transport und die Zellteilung erforderliche Zytoskelettdynamik unterstützt. NLP steht mit der Zentrosomenreifung sowie mit Prozessen der Mikrotubuli-Nukleation und -Organisation in Zusammenhang, die die Spindelbildung prägen und während der Mitose zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität beitragen. Störungen der Zentrosomen- und Spindelregulation sind für proliferative Erkrankungen und Phänotypen chromosomaler Instabilität relevant, wodurch NINL ein nützliches Ziel ist, um Signalwege zu analysieren, die die Zentrosomenfunktion mit dem Fortschreiten des Zellzyklus koppeln. In menschlichen Zellen liefern Untersuchungen zu NINL zudem Erkenntnisse über Mechanismen des mikrotubuliabhängigen Transports und der räumlichen Organisation von Organellen.

Das NLP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NINL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NINL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NINL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NLP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NINL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NLP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NINL-Exone abzielen, die für die NLP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NINL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NLP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NLP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NINL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NLP HDR-Plasmid (h) und NLP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NINL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NINL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.