Nkx-6.1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401997

Panoramica

NKX6-1 codifica il fattore di trascrizione homeobox Nkx-6.1, un regolatore chiave della specificazione della linea endocrina pancreatica e della maturazione delle cellule β. Nkx-6.1 coordina programmi trascrizionali che controllano la secrezione di insulina, l’accoppiamento metabolico stimolato dal glucosio e il mantenimento dell’identità delle cellule β attraverso reti che intersecano la regolazione genica associata a PDX1, NEUROD1 e MAFA. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di NKX6-1 sono state collegate a una compromessa funzione delle cellule β e a una disregolazione dell’omeostasi del glucosio, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi legati al diabete e dello sviluppo endocrino. Oltre alla biologia del pancreas, Nkx-6.1 è utilizzato come marcatore e nodo funzionale in modelli di differenziamento che esplorano l’impegno di linea e il controllo trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NKX6-1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NKX6-1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NKX6-1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nkx-6.1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NKX6-1 per lo studio della segnalazione di Nkx-6.1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NKX6-1 critici per la funzione di Nkx-6.1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NKX6-1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NKX6-1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nkx-6.1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nkx-6.1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NKX6-1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NKX6-1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.