Plasmide CRISPR/Cas9 KO NKG2-D (m): sc-424169

Présentation

Klrk1 code pour l’immunorécepteur activateur NKG2-D (KLRK1), un récepteur de type II transmembranaire de type lectine C, exprimé à la surface des cellules NK murines et de certains sous-ensembles de lymphocytes T CD8+. NKG2-D reconnaît des ligands induits par le stress et transmet des signaux via des protéines adaptatrices, déclenchant des voies liées à PI3K, Vav1 et Syk/ZAP70, qui favorisent la libération de granules cytotoxiques, la production de cytokines et la surveillance immunitaire. Cet axe intègre des signaux issus des dommages à l’ADN, des infections et de la transformation cellulaire afin de moduler les réponses effectrices de l’immunité innée et adaptative. Dans des modèles expérimentaux, des interactions NKG2-D–ligands dérégulées ont été associées à l’échappement immunitaire des tumeurs, à l’inflammation chronique et à une altération du contrôle des tissus infectés par des virus ou soumis au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NKG2-D (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Klrk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Klrk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Klrk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NKG2-D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Klrk1 pour l'étude de la signalisation de NKG2-D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Klrk1 essentiels à la fonction de NKG2-D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Klrk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NKG2-D plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NKG2-D plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Klrk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NKG2-D plasmide HDR (m) et le NKG2-D (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Klrk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Klrk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.