NK-2R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403149-ACT

TACR2 kodiert den Neurokinin‑2‑Rezeptor (NK‑2R), einen GPCR der Klasse A, der bevorzugt Tachykinine wie Neurokinin A bindet und dadurch die Kontraktilität glatter Muskulatur sowie sekretorische Antworten reguliert. Nach Ligandenbindung signalisiert NK‑2R überwiegend über Gq/11, aktiviert die Phospholipase C, fördert die Bildung von IP3 und DAG, mobilisiert intrazelluläres Ca2+ und stößt PKC‑abhängige Transkriptionsprogramme an. Die TACR2‑Aktivität ist mit der MAPK/ERK‑Signalgebung und einer umfassenderen, neuropeptidvermittelten Kommunikation verknüpft, die den Entzündungstonus und die Gewebe‑Erregbarkeit mitprägt. Eine fehlregulierte TACR2/NK‑2R‑Signalübertragung wird mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die für Hyperreaktivität der Atemwege und des Gastrointestinaltrakts, neurogene Entzündung und eine veränderte nozizeptive Verarbeitung relevant sind.

NK-2R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TACR2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NK-2R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TACR2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TACR2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NK-2R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TACR2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NK-2R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NK-2R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TACR2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.